Prosedur
Pewa
rnaan Imuno.
- Potong 3µm hirisan tisu dan lekatkan pada slaidyang telah disalut dengan
Poly-L-Lysine.
- Proses pembuangan Paraffin dan hidrat dilakukan ke
atas tisu.
- Slaid kemudian dimasukkan kedalam 3% H2O2
(Hidrogen Peroksidase) dalam methanol selama 15 minit.Tujuannya
untuk menghalang aktiviti endogenus.
- Kemudian slaid dimasukkan ke dalam air suling.
- Proses perawatan tisu dilakukan seperti di bawah:
A.
Perawatan menggunakan teknik ketuhar gelombamg mikro
Slaid dimasukkan ke dalam
bikar yang mengandungi 0.01M Larutan Pemampan Sitrat berpH 6.0
(2.1gm Asid Sitrat
dijadikan 1L.Gunakan lebih kurang 13mL 2M NaOH untuk jadikan pH 6.0)Seksyen tisu
akan dirawat dalam ketuhar gelombang mikro (larutan pemampan haruslah mendidih)
selama 2-5 minit.Setelah pemanasan,bikar dibiarkan sejuk selama 20 minit dan
proses slaid unutk langkah seterusnya.
B.
Perawatan menggunakan Tripsin
Slaid dimasukkan ke dalam 0.1% tripsin dalam TBS berpH 7.6 yang telah
dipanaskan pada suhu 37°C.Kemudian
tisu dieramkan selama 15
minit.
6.
Slaid dibasuh dalam air suling.
7.
Kemudian slaid dimasukkan ke dalam TBS
8.
Pengeraman serum normal selama 30 minit.
9.
Slaid dieramkan dengan antibodi primer (dengan pencairan yang optimum)
semalaman.Antibodi yang digunakan ialah Ki-67.
10.
Kemudian slaid dibasuh dengan TBS selama 2 minit dengan 2 kali tukaran.
11.
Antibodi ‘Biotinylated’ dimasukkan dan dieramkan selama 30 minit.
12.
Slaid dibasuh dengan TBS dengan dua
minit dengan dua kali tukaran.
13.
Kompleks Strep AB Complex/HRP dimasukkan dan dieramkan selama 30 minit.
14.
Slaid dibasuh dengan TBS dengan dua
minit dengan dua kali tukaran.
15.
HRP Kromogen (DAB) dimasukkan dan dieramkan selama 5 minit
16.
Slaid dibasuh dengan air suling.
17.
Proses ‘counterstain’ dengan perwarnaan Hematoxylin dilakukan dengan
5 kali pencelupan .
18.
Slaid dimasukkan ke dalam air dan kemudiannya ke dalam 1% larutan ammonia
untuk proses ‘blueing’.
19.
Proses akhir ialah rehidrat,pencerahan dan ‘mount’ menggunakan DPX.
