IMUNOHISTOKIMIA

  Pengenalan

  Imunologi adalah bidang yang merujuk kepada salah satu teknik yang baru dan sedang berkembang pengetahuannya di dalam Sains perubatan .Imunohistokimia merupakan salah satu kaedah yang penting dalam Patologi Klinikal dalam mengenalpasti penyakit Kanser. Ia juga digunakan untuk membezakan antara kanser-kanser yang menpunyai corak yang sama , untuk mengetahui punca atau tempat berlakunya Metastasis Tumor dan mengukur keberkesanan  rawatan terapi yang dijalankan ke atas pesakit kanser. Imunohistokimia ini difokuskan kepada tisu yang dimasukan atau menggunakan ‘formalin fixed paraffin embedded tissue’  dan dikaji dengan menggunakan mikroskop cahaya.

SEJARAH

       Bermula pada tahun 1942 , ALBERT H.COON dan pekerjanya merupakan orang yang pertama  menggunakan antibodi yang dilabel ,dalam Perwanaan Histologi. Mereka menggunakan antibodi yang dilabel dengan ‘Flourescent’ untuk teknik perwarnaan terus.

      Kemajuan yang paling besar yang dicapai ialah pengenalan antibodi yang bertindak terus pada antibodi pertama tersebut yang membawa perkembangan teknik tidak secara lansung (dua atau tiga lapisan) .Mellor et.al melakukan perkembangan teknik tidak lansung dengan cara pengeraman antibodi Primer secara ‘invivo’ dan beberapa tahun kemudian , dengan menggunakan Serum Arnab atau kambing yang dilabel dengan ‘Flourescent’ untuk mengesan Globulin-G manusia ,’invitro’ dalam tisu section.

      Flourescent merupakan kompaun yang digunakan khusus sebagai agen antibodi yang  dilabel sehingga pada tahun 1966 apabila Nakane &Pierce dan Aurameas & Uriel secara terbuka  memperkenalkan teknik tidak lansung menggunakan ‘horseradish peroxsidase –(HRP)’ label antibodi .Enzim label lain yang diperkenalkan seperti Alkaline Phosphatase (AP) dan Beta Galactosidase (B-gal) .

          Teknik tidak secara lansung diikuti pula dengan teknik tiga lapisan (bridge) dalam bentuk non –conjugated dan juga double bridge teknik. Sternberger et.al pula memperkenalkan teknik tiga lapisan menggunakan ‘preformed’ peroxidase-anti perxidase (PAP) kompleks yang menambah lagi kemampuan pengesanannya. Teknik ini merupakan revolusi Imunohistokimia dan dianggap penemuan baru yang besar untuk metodologi.

           Pada tahun 1974 , perwarnaan Imuno yang pertama diaplikasikan pada tisu formalin fiksatif dan ‘paraffin’ embedding telah dibentangkan .Pada masa yang sama , penggunaan antibodi ‘monoclonal’ juga diperkenalkan.

          Menjelang 10 tahun kemudian , prosedur jambatan peroxidase telah diperkembangkan antaranya  Guesdon et.al memperkenalkan teknik labeled avidin–biotin (LAB) pada tahun 1979 dan teknik  Hsu et.al avidin biotin complex (ABC) pada tahun 1981 .Teknik ini menggunakan avidin atau streptavidin yang berafiniti tinggi untuk biotin bertindakbalas dan keberkesanan pengesanannya lebih berbanding dari teknik Peroxidase- anti peroxidase (PAP) .

               Alternatif enzim lain untuk HRP , seperti b-gal diperkenalkan dan diperkembangkan pada teknik PAP analogues seperti contoh Phosphate anti Alkaline Phosphatase (APAAP) dan glucose oxidase anti glucose oxidase (GAG) . Penggunaan enzim alternatif ini digunakan sebagai pilihan warna dan untuk mengelakkan gangguan ekspressi  ‘ endogenous peroxidase’.

                 Pada tahun 1983 , teknik Imuno gold-silver staining (IGSS) yang biasanya digunakan pada aplikasi mikroskop electron telah dialihkan untuk digunakan pada mikroskop cahaya.IGSS ialah teknik Pewarnaan imuno  secara tidak lansung dimana antibodi kedua dikonjugate kepada ‘colloidal gold particles’ yang boleh dilihat dengan reaksi ‘presipitasi silver’ .Aplikasi Amplikasi signal yang dihasilkan dengan pengumpulan biotinylated tyramine pada tapak dimana peroxidase berada.

                   Kemajuan terbaru dalam Imunostaining ialah Dextran Polymer Visualisation System .Dalam sistem ini ,tiga langkah ; kaedah visualisasi digunakan ,berdasarkan pada affinity antara avidin dan biotin ,akan ditentukan oleh Dextran Polymer Couple  samada secara lansung kepada antibodi primer atau antibodi sekunder . Sistem komersial ini yang berada dipasaran (eg.DAKO< Glostrup ,Denmark ) dan dilaporkan sama sensitive dengan teknik klasik ABC .Kelebihan system ini,ia dapat menghalang pewarnaan tidak spesifik pada endogenous biotin. Sistem ini juga berjaya digunakan dalam imunostaining berganda atau ‘multiple imunostaining’.