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TECNICA DE LA PARAFINA

 

Se utiliza para preparar cortes de tejido y poderlos observar a microscopio, por lo tanto estas son las caracteristicas:

 

1.    OBTENCION O MUESTRA DE TIJIDO:

Se obtienen por una biopsia (extraccion de un fragmento de tejido)

Se diseca con cuidado, el tejido por medio de un instrumento cortante (bisturi, tijeras, pinzas sacabocado, cuchilla para legrar).

tamao aproximado de 1cm en todas sus dimenciones.

En caso de cadaver= se toma una muestra de tejido de preferencia recien muerto para evitar la degradacion.

 

2.    FIJACION:

Evita la degradacion post-mortem.

Endurece los tejidos blandos.

Se usa formaldheido al 4% en solul\cion acuosa amortiguada hasta obtener un pH neutro (formol).

Evita la lisis.

sirve de Antiseptico

Se puede utilizar el tetraoxido de osmio fijador para microscopio electronico.

 

3.    DESHIDRATACION:

Es una deshidratacion gradual (se logra pasar el bloque de tejido por alcohol de diferentes potencies hasta llegar hasta el absoluto).

El alcohol no es un solvente de la parafina, asi que hay que sustituirlo por xilol u otro solvente que se mezcle con el alcohol.

 

4.    ACLARAMIENTO:

Se pasa el bloque deshidratado con alcohol a traves de xilol en cambios sucesivos, hasta sustituir el alcohol por xilol en preparacion para inclusion.

 

5.    INCLUSION:

El bloque penetrado por el xilol, se pasa por parafina caliente varias veces.

La parafina derretida llena los espacios antes ocupados por el agua y al endurecerse, cuando se enfria hace que el bloque este listo para el corte.

 

6.    CORTE:

Se elimina la parafina

Se hace el corte con el microtomo.

El espesor del corte es de 3 a 6 mm. 1mm = (0.0001mm)(1X10-6m).

 

7.    TINCION Y MONTAJE:

La tincion se hace con soluciones acuosas para que la parafina que ha penetrado en el corte sea sustituido por agua y pasar la atraves del xilol, para eliminar el xilol y por varios baos de alcolo de diversas potencies y al final con agual.

Montaje: se pasa por una serie de recipients con alcohol de diversas potencies hasta llegar al absoluto y despues poe el xilol se pone una gota de balsamo de Canada.

 

8.    CORTES POR CONGELACION:

los resultados son en 10-15 minutos.

examinarlos a corto plazo.

Fijacion suplementaria

A base de nitrogeno liquido

se corta por medio del criostato del microtomo a temperatures menores de cero grados

se pueden obtener cortes mas gruesos.

 

TINCION HISTOLOGICA

 

Los colorants histologicos actuan de dos formas en combinacion

= permiten al observador reconocer algunos componentes tisulares, por tincion diferencial.

= Imparten sus colores en diversas medidas con lo cual hay una graduacion en la colaboracion.

HEMATOXILINA:color basofilo, da un color azul veolaceo y reacciona con sustancias acidas y se identifica en el Nucleo (DNA).

EOSINA: color acidofilo, da un color rasa a rojo, se relaciona con sustancias basofilas.

 

Estas sustancias son sales neutras y cada una posee un radical acido y uno basico.

REACCIONES DE ACIDO PERYODICO DE SHIFF (PAS), PARA TEIR POLISACARIDOS

 

PAS: sirve para demostrar la presencia de glucogeno en las celulas.

REACTIVO DE SHIFF: es fusina basica decolorada, se usa para detectar los grupos aldheios con los cuales se combina para producir un complejo de color violeta.

Se aplica acido peryodico de shiff que reacciona con los grupos glycol; se hace una conversion de la cadena de los sacaridos o polisacaridos en aldheidos.

 

 

COLORANTES DE GRASA

 

Se utiliza para distinguir si un higado contienen innumerables orificios redondos o un gran espacio (se dice que son producto de la disolucion de gotitas de grasa por lo tanto se dice que el paciente tiene un higado graciento.

Se utilizan cortes por congelacion para demostrar dicha substancia con colorants especiales, como son Scharlach R o Sudan III o IV (color = ladrillo [caf-anaranjado]).