TECNICA DE LA PARAFINA
Se utiliza para preparar cortes de tejido y
poderlos observar a microscopio, por lo tanto estas son las caracteristicas:
1. OBTENCION O
MUESTRA DE TIJIDO:
à Se obtienen por
una biopsia (extraccion de un fragmento de tejido)
à Se diseca con
cuidado, el tejido por medio de un instrumento cortante (bisturi, tijeras,
pinzas sacabocado, cuchilla para legrar).
à tamaño aproximado
de 1cm en todas sus dimenciones.
à En caso de
cadaver= se toma una muestra de tejido de preferencia recien muerto para evitar
la degradacion.
2. FIJACION:
à Evita la degradacion
post-mortem.
àEndurece los
tejidos blandos.
à Se usa
formaldheido al 4% en solul\cion acuosa amortiguada hasta obtener un pH neutro
(formol).
à Evita la lisis.
à sirve de
Antiseptico
à Se puede utilizar
el tetraoxido de osmio à fijador para microscopio
electronico.
3. DESHIDRATACION:
àEs una
deshidratacion gradual (se logra pasar el bloque de tejido por alcohol de
diferentes potencies hasta llegar hasta el absoluto).
à El alcohol no es
un solvente de la parafina, asi que hay que sustituirlo por xilol u otro
solvente que se mezcle con el alcohol.
4. ACLARAMIENTO:
à Se pasa el bloque deshidratado
con alcohol a traves de xilol en cambios sucesivos, hasta sustituir el alcohol
por xilol en preparacion para inclusion.
5. INCLUSION:
à El bloque
penetrado por el xilol, se pasa por parafina caliente varias veces.
à La parafina derretida llena los
espacios antes ocupados por el agua y al endurecerse, cuando se enfria hace que
el bloque este listo para el corte.
6.
CORTE:
à Se elimina la parafina
à Se hace el corte con el microtomo.
à El espesor del corte es de 3 a 6 mm. 1mm = (0.0001mm)(1X10-6m).
7. TINCION Y MONTAJE:
à La tincion se hace con soluciones
acuosas para que la parafina que ha penetrado en el corte sea sustituido por
agua y pasar la atraves del xilol, para eliminar el xilol y por varios baños de
alcolo de diversas potencies y al final con agual.
àMontaje: se pasa por una serie de recipients con alcohol de
diversas potencies hasta llegar al absoluto y despues poe el xilol se pone una
gota de balsamo de Canada.
8. CORTES POR
CONGELACION:
à los resultados son en 10-15
minutos.
à examinarlos a corto plazo.
à Fijacion suplementaria
à A base de nitrogeno liquido
à
se corta por medio del criostato del microtomo a temperatures menores de cero
grados
à
se pueden obtener cortes mas gruesos.
TINCION HISTOLOGICA
à
Los colorants histologicos actuan de dos formas en combinacion
=
permiten al observador reconocer algunos componentes tisulares, por tincion
diferencial.
=
Imparten sus colores en diversas medidas con lo cual hay una graduacion en la
colaboracion.
HEMATOXILINA:color basofilo, da un color
azul veolaceo y reacciona con sustancias acidas y se identifica en el Nucleo
(DNA).
EOSINA:
color
acidofilo, da un color rasa a rojo, se relaciona con sustancias basofilas.
Estas sustancias son sales neutras y cada
una posee un radical acido y uno basico.
REACCIONES DE ACIDO
PERYODICO DE SHIFF (PAS), PARA TEÑIR POLISACARIDOS
PAS: sirve para demostrar la presencia de glucogeno en las celulas.
REACTIVO DE SHIFF: es fusina basica decolorada, se usa para detectar los grupos aldheios
con los cuales se combina para producir un complejo de color violeta.
Se aplica acido peryodico de shiff que
reacciona con los grupos glycol; se hace una conversion de la cadena de los
sacaridos o polisacaridos en aldheidos.
COLORANTES DE GRASA
à Se
utiliza para distinguir si un higado contienen innumerables orificios redondos
o un gran espacio (se dice que son producto de la disolucion de gotitas de
grasa por lo tanto se dice que el paciente tiene un higado graciento.
à Se utilizan cortes por congelacion para
demostrar dicha substancia con colorants especiales, como son Scharlach R o
Sudan III o IV (color = ladrillo [café-anaranjado]).
